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细胞间的组成一般分为准备区,制备区,贮存区和无菌区4个区域。
准备区的主要功能是进行清洗、消毒、准备工作;制备区主要是用来进行培养基、试剂配置;贮存区则是用于细胞库及物品存放;无菌区是实验人员进行更衣缓冲及操作培养的地方。而细胞培养过程中就功能分类又可以划分为细胞培养、贮存、配液和灭菌4个部分。
一.细胞培养仪器及简介
【1.超净工作台】
细胞培养一般采用垂直流超净工作台,正压状态,气体外泄,只保护操作对象,而不保护工作人员和实验室环境。
紫外照射实现杀菌功能,紫外灭菌(表面)+臭氧灭菌(死角,挡板关闭),每次紫外照射20-30min,鼓风10min后使用(注意培养室换风),洁净度达到百级。
紫外灯在3000小时后功率会将至原来的70%,及时更换上方的粗滤布定期拆下清洗。
【2.生物安全柜】
负压状态,气体不外泄,既保护样品,更侧重于保护操作人员和环境,二级安全细胞,携带病毒(如hele/kB),原代培养的临床人源样本(真菌),慢病毒相关实验。
【3.CO2钢瓶】
CO2钢瓶主要用于CO2气体的贮存。在细胞培养的过程中大多数细胞都是需要在CO2含量为5%的条件下进行的,CO2钢瓶主要连接培养箱用于CO2含量的稳定维持。
【4.倒置显微镜】
倒置式显微镜是细胞培养实验室日常工作常规必备设备,主要用于日常了解细胞的生长情况并观察有染发生,如资金允许,建议选用配置有照相系统的相差显微镜、解剖显微镜、荧光显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等,可随时拍摄并记录细胞生长情况。
【5.台式离心机】
离心机是利用离心力对混合液(含有固形物)进行分离和沉淀的一种专用仪器,主要用与制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤和收集细胞。细胞培养中的离心速率一般为300xg(约1000rpm),5-10min,过高的转速,将造成细胞死亡。根据不同需求,有大容量、可调温度离心机、高速离心机和低温冷冻离心机等更多功能离心机可选择。
【6.CO2培养箱】
CO2是细胞的代谢产物,是细胞生长的必需成分,又与维持培养液的PH相关。细胞培养中,O2、CO2都是细胞生长的必要条件,CO2培养箱有干式与湿式,培养条件一般设置为37℃,5%CO2。CO2培养箱水盘的水防止污染的方式采用无菌水+定期2周更换+防腐剂(0.02%叠氮钠或者2%硫酸铜。
【7.细胞计数板(器)】
细胞计数器是集计数、统计、显示为一体的微电脑控制的计数仪器、计数可靠、使用方便。
【8.移液器】
移液器的主要作用是在细胞培养的过程中进行培养基等液体的吸取和移除。在细胞培养过程中用到的主要量程由10ul/100ul/200ul/1000ul组成。